Органическая химия

Взгляд из лаборатории

FONT_SIZE

SCREEN

Cpanel

Статьи

Хроматография - это метод разделения и анализа смесей веществ, основанный на... Читать далее...

Видеоуроки

Видеоурок, посвященный основам Ядерного Магнитного Резонанса. Смотреть...

Подбор элюента и сорбента для тонкослойной (ТСХ) и колоночной (КХ) хроматографии
(Методика)

ТСХ пластина. Фотограф: Admin1. Подбор элюента для тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Так как наиболее часто используются пластины с силикагелем в качестве сорбента разберем подбор элюента именно на них. Методика не отличается в случае окиси алюминия в качестве сорбента, и обратна в случае сорбентов с обращенной фазой.

Ключевым моментом при подборе растворителя является относительная полярность растворителей, которую можно посмотреть Здесь.

  1. На несколько пластин длиной ~7 см и шириной ~1 см наносится раствор разделяемой смеси (приготовление ТСХ пластины см. Тонкослойная хроматография).

    Посмотреть результат

  2. Подбор элюента начинают с наименее полярных растворителей, таких как н-гептан, н-гексан, н-пентан, циклогексан
    Посмотреть результат
  3. Верхнее вещество с Rf = 0.2 уже можно выделить в индивидуальном виде колоночной хроматографией. Часть смеси осталось на старте, следует продолжить подбор элюента для анализа ее состава. Для этого следует использовать более полярные системы. Например, смеси н-гексан/этилацетат (от ~10:1 до ~5:1), бензол, толуол, хлороформ.
    Посмотреть результат
  4. Теперь первое пятно выходит почти с фронтом растворителя. На колонке оно выйдет в 1 - 2-ой фракциях. Наиболее эффективно удастся очистить 2 вещество с Rf = 0.4. Вещества с Rf = ~0.15 скорее всего поделить не удастся. Вещество (или смесь, пока не ясно) "сидящее на старте" не выйдет с колонки. Так как часть исходной смеси все еще имеет Rf = 0 следует продолжить анализ. Переходим к более полярной смеси - н-гексан/этилацетат (от ~2:1 до чистого этилацетата), хлористый метилен
    Посмотреть результат
  5. В выбранной смеси на колонке уже не удастся разделить первые 4 вещества, скорее всего, будут получены смеси 1+2 и 3+4, однако, возможно, удастся выделить 5 вещество (хотя, скорее, оно захватит часть от 3+4) и, скорее всего, удастся выделить 6 вещество. Однако, часть смеси еще на старте. Переходим к сильно полярным растворителям: метанол, метанол + добавка кислоты (уксусная) или основания (триэтиламин), изопропанол, этанол и т.п.
    Посмотреть результат
  6. В выбранной смеси 1-5 вещества выходят с фронтом, 6 вещество уже не удастся выделить на колонке (оно выйдет вместе с 1-5 веществами), зато 7-е вещество удастся эффективно очистить. Так как на старте не осталось больше веществ - ТСХ анализ смеси практически окончен.
  7. Иногда удается подобрать смесь растворителей для смеси веществ, которые не разделялись в другой смеси. Хотя полярность обоих смесей, близка. Для этого следует сравнивать элюенты резко отличные по составу. Пример: н-гексан/этилацетат (А) или смесь толуол/хлористый метилен (или хлороформ) (Б); метанол или этилацетат/триэтиламин и т.п.
    Посмотреть результат
    A Б
  8. Иногда компонент смеси идет с фронтом элюента уже в неполярном гексане. Или не сдвигается со старта метанолом с добавкой триэтиламина. В этом случае для его очисти необходимо использовать другой сорбент (обращенная фаза, сефадекс и т.д.).

2. Определение устойчивости компонентов смеси на данном сорбенте в данном элюенте (двумерная тонкослойная хроматография).

  1. На Пластину ТСХ (приготовление см. Тонкослойная хроматография) размерами 6 х 6 см в нижний левый край на расстоянии 5 мм от обоих краев наносят раствор вещества.
    Посмотреть результат
  2. Пластину элюируют найденным в 1 пункте этой статьи элюентом.
    Посмотреть результат
  3. Пластину высушивают при комнатной температуре в течении 10-20 минут.
  4. Пластину элюируют расположив вниз тем левым боком вниз (в элюент).
    Посмотреть результат

    A Б
  5. Высушивают пластину и проявляют.

Если количество пятен не отличается от количества пятен при одномерном (обычной) тонкослойном хроматографическом анализе, значит вещество стабильно в выбранной системе (все пятна располагаются вдоль диагонали пластины) (См. Вариант А на рисунке выше). Если появляются "лишние" пятна (лежат не на диагонали пластины) значит вещество не стабильно (См. Вариант Б на рисунке выше) и следует заменить или элюент (например, протонный на апротонный) или сорбент (кислый силикагель на нейтральную окись алюминия).