Хроматография - это метод разделения и анализа смесей веществ, основанный на... 
Видеоурок, посвященный основам Инфракрасной спектроскопии. - Подробности
- Опубликовано 14 Сентябрь 2013
- Автор: Administrator
Элюотропный ряд растворителей для силикагеля
В приведенной ниже таблице расположены вначале слабо полярные растворители, и в конце - сильно полярные.
Ряд растворителей по Шталю |
Ряд растворителей по Траппу |
| Гексан | |
| Гептан | Петролейный эфир |
| Циклогексан | Циклогексан |
| Дисульфид углерода | |
| Четыреххлористый углерод | Четыреххлористый углерод |
| Дихлорэтилен | |
| Бензол | Бензол |
| Толуол | |
| Хлороформ | |
| Диэтиловый эфир | Диэтиловый эфир |
| Тетрагидрофуран | |
| Хлороформ | |
| Этилацетат | Этилацетат |
| Пиридин | |
| Ацетон | Ацетон |
| Метилэтилкетон | |
| н-Бутанол | |
| Этанол | Этанол |
| Метанол | Метанол |
| Формамид | |
| Вода | Вода |
| Уксусная кислота | |
| Пиридин |
Литература:
- Набиванец Б.И. Хроматографический анализ. 1979. 264 с
- Беккер X.N. Органикум. Часть 1. 1992. 488 с
Элюотропный ряд растворителей для Al2O3
В приведенной ниже таблице расположены вначале слабо полярные растворители, и в конце - сильно полярные.
Растворитель |
| Фторалканы |
| н-Пентан |
| н-Гексан |
| н-Гептан |
| Изооктан |
| Циклогексан |
| Четыреххлористый углерод |
| Диизопропиловый эфир |
| Толуол |
| н-Пропилхлорид |
| Бензол |
| Этилбромид |
| Этиловый эфир |
| Хлороформ |
| Метилен хлорид |
| Тетрагидрофуран |
| Этиленхлорид |
| Метилэтилкетон |
| Ацетон |
| Диоксан |
| Этилацетат |
| Метилацетат |
| Нитрометан |
| Ацетонитрил |
| Пиридин |
| н-Пропанол |
| Этанол |
| Метанол |
| Гликоль |
| Вода |
| Формамид |
| Уксусная кислота |
Литература:
- Соколова В.И. Жидкостная хроматография нефтепродуктов. 1984. 144 с
- Подробности
- Опубликовано 14 Сентябрь 2013
- Автор: Administrator
Реактивы для обнаружения веществ на ТСХ.
Органические соединения.
Источник: Э. Шталь "Хроматография в тонких слоях". М., 1965
Универсальные
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Ненасыщенные соединения | Флуоресцеин - бромная проба | Посмотреть Массу для нанесения готовят с 0,04% водным раствором флуоресцеина натрия вместо воды. После разделения продувают над высушенной пластинкой пары брома. В результате образования эодина флуоресценция гасится всюду, за исключением пятен веществ, которые присоединяют бром за счет ненасыщенных связей. |
| Универсальный реактив | Перманганат калия - уксусная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: смесь равных объемов 0,1 н. Раствора перманганата калия и 2 н. уксусной кислоты. |
| Универсальный реактив | Перманганат калия - серная кислота (универсальный реактив) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5 г перманганата калия в 15 мл концентрированной серной кислоты. (Осторожно! Опасность взрыва).Проведение реакции: хроматограмму высушивают от растворителя и опрыскивают реактивом; вещества появляются в виде белых пятен на розовом фоне. |
Азотсодержащие гетероциклы и амины
Алкалоиды
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Алкалоиды | Реактив Несслера | Посмотреть Раствор для опрыскивания: реактив Несслера. Примечание. По данным Шульца п Штрауса, с реактивом Неслера реагируют апоморфин, гидрастиинн и физостигмин. |
| Алкалоиды и N-содержащие гетероциклы | Йодоплатинат | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 3 мл 10%-наго раствора платино(IV)хлористоводородной кислоты смешивают с 97 мл воды и прибавляют 100 мл 6% водного раствора йодида калия. В темной склянке сохраняется длительное время. |
| Алкалоиды и амины | Серная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: к 100 мл абсолютного этанола добавляют 50 капель серной кислоты (1,84).Примечание: Благодаря отщеплению воды от таких соединений как глюкозиды, алкалоиды и амины, образуются продукты разложения, которые флуоресцируют в монохроматическом УФ-свете. |
| Алкалоиды с пиридиновым кольцом | Реактив Кенига | Посмотреть Предварительная обработка. Перед опрыскиванием хроматограмму выдерживают в течение часа в камере, в которой находится стакан с раствором бромциана (яд!). Раствор бромциана готовят из охлажденной насыщенной бромом воды, в которую добавляют 10% раствор цианида натрия до исчезновения окраски брома. Раствор для опрыскивания: 2 г. п-аминобензойной кислоты растворяют в 75 мл 0.75 н. соляной кислоты. Раствор 96% этанолом доводят до 100 мл. |
| Алкалоиды, органические соединения, содержащие йод и токоферолацетаты | Сульфат церия (IV) - серная кислота (на солнечном свету реактив изменяется) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0.1 г сульфата церия (IV) растворяют в 4 мл воды. После добавления 1 г трихлоруксусной кислоты нагревают до кипения и медленно по каплям добавляют серную кислоту (1,84) до полного растворения.Последующая обработка: несколько минут нагревают при 110 0C до появления пятен. Реактив окрашивает алкалоиды, апоморфин, бруцин, колхицин, папаверин и физостигмин. Его также можно применять для обнаружения органических соединений, содержащих йод, токоферолацетатов. |
Аминокислоты
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Аминокислоты | 2-Нафтохинон-4-сульфокислота (натриевая соль) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,2 г натриевой соли 2-нафтохино-4-сульфокислоты кастворяют в 100 мл 5% раствора карбоната натрия. Опрыскиваме следует проводить приблизительно через 10-15 мин после приготовления раствора для опрыскивания, без последующей обработки. |
| Аминокислоты (Аргинин и гуанидин) | 1-Нафтол | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1) 0,1% раствор 1-нафтола в 1 н. КОН. 2) Смесь 100 мл 5% водного раствора NaOH и 2 мл брома.Проведение реакции: сначала опрыскивают раствором 1, затем раствором 2. При обнаружении стрептомицина рекомендуют вместо раствора 2 использовать смесь 50 мл водного раствора гипохлорита натрия (13% активного хлора) и 50 мл этанола. |
| Аминокислоты (оксиаминокислоты: серин, треонин, оксипролин) | Реактив Несслера | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1%-ный водный раствор метапериодата натрия. 2) Реактив Несслера.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1, затем хроматограмму высушивают при комнатной температуре и опрыскивают реактивом 2. |
| Аминокислоты и амины | Нингидриин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,3 г нингидрина растворяют в 100 мл н-бутанола и добавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты.Последующая обработка: пластинку нагревают около 30 мин при 60 0С или 10 мин при 110 0С. Чувствительность: от 0,1 нг для пролина до 0,001 нг для глицина. Стабилизация окрашенного нингидрином пятна. Раствор для опрыскивания: 1 мл насыщенного водного раствора ни-трата меди с добавкой 0,2 мл 10%-ной азотной кислоты растворяют в 100 мл этилового спирта (96%). Проведение реакции: на нингидриновое пятно напыляют раствор до максимально интенсивного окрашивания и помещают пластинку в закрытый сосуд, содержащий стакан с концентрированным аммиаком. Образующийся красный комплекс меди устойчив только в отсутствие свободных ионов водорода и сильных комплексообразователей. |
| Аминокислоты | Нингидрин - нитрат меди (полихроматический реактив) | Посмотреть Исходные растворы: 1) 0,1 г нингидрина растворяют в 50 мл абсо-лютного спирта и добавляют 100 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл 2,4,6-коллидина. 2) 0,5 г нитрата меди [Сu(NOз)2·3Н2O] растворяют в 50 мл абсолютного спирта. Перед употреблением смешивают растворы 1 и 2 в отношении 50:3. Пластинки опрыскивают. Последующая обработка: хроматограмму нагре-вают 4 мин до 110 0С и появившееся пятно сразу же отмечают, так как уже через 10 мин оно изменяется и бледнеет (чувствительность около 0,5-1 нг аминокислоты). |
| Аминокислоты (орнитин, лизин) и амины | Ванилин | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 2 ванилина растворяют в 100 мл н-пропанола. 2) 1°/о раствор КОН в спирте. Проведение реакции: хроматограмму опрыскивают раствором 1 и 10 мин нагревают при 110° в сушильном шкафу. Орнитин дает яркую желто-зеленую флуоресценцию в монохроматическом УФ-свете, лизин - слабую желто-зеленую флуоресценцию. После опрыскивания раствором 2 еще раз нагревают. Орнитин сначала окрашивается в розовый цвет, а затем бледнеет, а протин, окснпролин, пипеколиновая кислота и саркозин через несколько часов окрашиваются в красный цвет, гликоколь становится сине-зеленым, остальные аминокислоты окрашиваются в светло-коричневый цвет. |
Амины
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Амины | Азотная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: к 100 мл абсолютного этанола добавляют приблизительно 50 капель азотной кислоты (1,40). (Наблюдение продуктов разложения в монохроматическом ультрафиолетовом свете).П р и м е ч а н и е. Раствор для опрыскивания этой концентрации или большей может найти применение также для открытия других органических соединений при хроматографии в тонких слоях. Флуоресцирующие пятна появляются часто только после длительного нагревания при 120 °C. |
| Амины (вторичные алифатические и алициклические) | Нитропруссид натрия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 5 г нитропруссида натрия растворяют в 100 мл 10% водного раствора ацетальдегида. Перед употряблением 1 объем этого раствора смешивают с 1 объемом 2% раствора карбоната натрия. |
| Амины (фенилэтиламины) | Йодат калия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1%-ный водный раствор йодата калия.Проведение реакции: после опрыскивания хроматограмму нагревают 2 мин при 100-110 0C. |
| Ариламины и подобные соединения | Хромовая смесь | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 5 г бихромата калия растворяют в 100 мл 40% серной кислоты (различная окраска, в зависимости от амина). |
| Ароматические амины | Глюкоза - фосфорная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 2 г. глюкозы растворяют в смеси 10 .мл ортофосфорной кислоты (1,70) и 40 мл воды. В раствор добавляют 30 мл этанола н 30 мл н-бутанола. Последующая обработка: пластинки нагревают около 10 мин, при 115°. |
| Этаноламин | п-Хинон | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5 г п-хинона (бензохинона) растворяют в смеси 10 мл пиридина и 40 мл бутанола. После опрыскивания сразу жe появляется красное пятно этаноламина. Холин с реактивом не реагирует. |
| Цитруллин, мочевины, триптамин, триптофан | 4-Диметиламинобензальдегид - соляная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания (водный): реактив Эрлиха на уробилиногене.Раствор для опрыскивания (спиртовой): 1%-ный раствор 4'-диметнламинобензальдегида в 96%-ном этаноле.Проведение реакции: в зависимости от условий опрыскивают водным или спиртовым раствором. Последующая обработка: обработанную раствором хроматограмму помещают на 3-5 мин в сосуд, насыщенный парами соляной кислоты. |
Кислоты
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Кислоты | Глюкоза - анилин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 2 г глюкозы растворяют в 20 лад воды; растворяют также 2 мл анилина в 20 мл этанола. Оба раствора сливают в мерную колбу на 100 .дм и доводят до метки н-бутанолом. Проведение реакции: после опрыскивания хроматограмму нагревают 5-10 мин при 125 0C (темно-коричневое пятно на белом фоне). |
| Кислоты | 2,6-Дихлорфенолиндофенолнатрий | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1%-ный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенол натрия в этаноле. (Красное пятно на светло-голубом фоне быстро бледнеет). |
| Кислоты | Нитрат серебра - пирагаллол | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0,17 г нитрата серебра растворяют в 1 мл воды, добавляют 5 мл раствора аммиака и разбавляют до 200 мл этанолом. 2) 6,5 мг (0,0005 моля) пирогаллола растворяют в 100 мл этанола.Проведение реакции: сначала опрыскивают раствором 1, потом раствором 2. |
| Кислоты | Хинидин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,3% раствор хинидина в хлороформе.Предварительная обработка: при обработке хроматограммы растворителем, содержащим летучие кислоты (нелетучие использовать нельзя), необходимо нагревать затем пластинку в токе воздуха до 60-80 0C.Проведение реакции: после интенсивного опрыскивания хроматаграмму нагревают в течение 10 мин при 110-120 0C в сушильном шкафу и рассматривают в монохроматическом ультрафиолетовом свете. |
| Тиокислоты | Нитрат серебра - аммиак - хлорид натрия | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1.) 50 мл 0,1 н. раствора смешивают перед употреблением с 50 мл 10% раствора аммиака. Эту смесь хранить нельзя. 2) 10% водный раствор хлорида натрия.Проведение реакции: сначала опрыскивают раствором 1, затем сушат и опрыскивают раствором 2 Хроматограмму оставляют на дневном свету на некоторое время до максимального окрашивания пятен. |
| Фосфорные кислоты | Молибдат аммония - хлорид олова (II) | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1%-ный водный раствор молибдата аммония. 2) 1%-ный раствор хлорида олова (II) в 10%-ной соляной кислоте.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1 и после высушивания - раствором 2; в случае необходимости 3-5 мин нагревают при 105 0С. |
| Барбитуровые кислоты | Нитрат кобальта - аммиакат | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1% раствор нитрата кобальта в абсолютном этаноле. Последующая обработка: хроматограоту высушивают и помещают в сосуд с газообразным аммиаком, насыщенным водяными парами. В а р и а н т ы: а) Раствор для опрыскивания: 2% спиртовый раствор ацетата кобальта. Последующая обработка: помещают хроматограмму в сосуд с парами пиридина. б) Растворы для опрыскивания: 1) 0,5% раствор ацетата кобальта в метаноле. 2) 0,5% раствор гидроокиси лития в метаноле. Проведение реакции. Опрыскивают раствором 1, а затем раствором 2. |
| Барбитуровые кислоты | Нитрат ртути (I) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1% водный раствор нитрата ртути (I)118. Ацетат ртути - дифенилкарбазон для пуринов.Растворы для опрыскивания: 1) 0,25 г ацетата ртути (1) растворяют с добавлением нескольких капель ледяной уксусной кислоты в 100 мл 96% этанола. 2)0,05 г дифенилкарбазона растворяют в 100 мл, 96% этанола.Проведение реакции: сначала опрыскивают раствором 1, а затем раствором 2. Хроматограмма становится фиолетовой, но на месте, где находится пурин, появляется потемнение. При нагревании до 120 0C в сушильном шкафу с окошком фон постепенно обесцвечивается.Примечание: Отдельные ртутные пятна имеют различную устойчивость и постепенно исчезают при нагревании, вследствие чего в процессе нагревания необходимо непрерывное наблюдение. Лучше всего обвести карандашом пятна сразу же после их появления. |
| Пиридиимонокарбоновые кислоты | Бензидин - сульфат меди | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0,3 г сульфата меди растворяют в 100 мл смеси, состоящей из 5 объемов воды и 4 объемов этанола. 2) 0,1%-ный раствор бензидина в 50%-ном этаноле.Проведение реакций: после опрыскивания раствором 1 хроматограмму высушивают при 60°, а затем опрыскивают раствором 2 (синие пятна). |
| Урановые кислот и флавониды | Основной ацетат свинца | Посмотреть Раствор для опрыскивания: отфильтрованный насыщенный водой раствор ацетата свинца. Последующая обработка: сушат в течение 10 мин при 110 0C. |
Липиды
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Липиды | Бромтимоловый синий | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,04 г бромтимолового синего растворяют в 100 мл 0,01 н. NaOH. |
| Липиды | Фосфорновольфрамовая кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 20% раствор фосфорновольфрамовой кислоты в этаноле. Последующая обработка: нагревают 20 мин в сушильном шкафу при 70 0C. |
| Липиды (Насыщенные и ненасыщенные) | 2',7'-Дихлорфлуореецеин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,2%-ный раствор 2',7'-дихлорфлуаресцеина в 96%-ном этаноле. |
| Липиды с прямой цепью | Циклодекстрин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1% раствор а-цнклодекстрина в 30% этиловом спирте.Последующая обработка: после опрыскивания пластинку помещают в сосуд с парами йода. |
| Гликолипиды | Дифениламин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: готовят смесь из 20 мл 10%-кого раствора дифениламина в этаноле, 100 мл концентрированной соляной кислоты и 80 мл ледяной уксусной кислоты.Последующая обработка: нагревают 5-10 мин при 100 0C. |
Перекиси
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Перикиси | Йодид калия - крахмал | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 40 мл 4% водного раствора йодида калия смешивают с 40 мл ледяной уксусной кислоты и добавляют немного (на кончике шпателя) цинковой пыли. 2) 1%-ный свежеприготовленный водный раствор крахмала. Проведение реакции: после отфильтровывания цинковой пыли опрыскивают раствором 1. Через 5 мин проводят интенсивное опрыскивание реактивом 2, пока слой не станет прозрачным, причем перекись можно обнаружить по выделившемуся йоду в виде голубого пятна. |
| Перекиси | Роданид аммония - сульфат железа (II) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,2 г роданида аммония растворяют в 15 мл ацетона. Непосредственно перед употреблением добавляют 10 мл свежеприготовленного 4% водного раствора сульфата железа (II).Примечание. Только быстрое появление красно-коричневого пятна или зоны указывает на присутствие перекиси. Спустя некоторое время весь слой окрашивается в красновато-коричневый цвет. |
| Перекиси | Тиоцианат аммония | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0.4 г тиоциаиата растворяют в 30 мл ацетона 2) 1,2 г сульфата железа (II) растворяют в 30 мл воды.Проведение реакции: сначала опрыскивают раствором 1, недолго сушат, а затем опрыскивают раствором 2. |
Сахара
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Сахара (кетозы и урановые кислоты) | 1,3-Диоксинафталин (нафторезорцин)-трихлоруксусная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 объем спиртового раствора нафторезорцина (0,2 г нафторезорцина в 100 мл этанола) перед употреблением смешивают с 1 объемом 20%-наго водного раствора трихлоруксусной кислоты. Последующая обработка: для обнаружения кетоз нагревают 5-10 мин в сушильном шкафу при 100 -105°, для обнаружения урановых кислот нагревают I0-I5 мин во влажной атмосфере (водяная баня) при 70-80 0C. Примечание. Окраске мешает присутствие коллидина и пиридина. Вместо нафторезорцина можно применять резорцин, орцин, флороглюцин или 1-нафтол; 1 объем трихлоруксусной кислоты можно заменить 0,1 частью ортофосфорной кислоты (d=1,7). |
| Сахара (аминосахара) | 4-Диметиламинобензальдегид-ацетилацетон | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0,5 мл смеси из а мл 50%-наго водного раствора КОН и 20 мл этанола непосредственно перед употреблением добавляют к 10 мл смеси из 0,5 мл ацетилацетона и 50 мл н-бутанола. 2) 1 г 4-диметиламинобензальдегида растворяют в 30 мл этанола. Раствор смешивают с 30 мл соляной кислоты (.1,1,9). Перед употреблением разбавляют 180 мл бутанола-1. Проведение реакции: после опрыскивания раствором 1 пластинки нагревают 5 мин при 100, а после опрыскивания раствором 2 сушат. 5 мин при 90 0C. |
| Сахара (дезоксисахара) | п-Нитроанилин - периодная кислота | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1 объем насыщенного водного раствора метапериодата натрия разбавляют 2 объемами воды. 2) 4 объема 1% раствора п-нитроанилина в этаноле смешивают с 1 объемом соляной кислоты (1,19).Проведение реакции: после опрыскивания пластинки раствором 1 ждут 10 мин, затем опрыскивают раствором 2. Дезоксисахара и гликоли дают желтое сильно флуоресцирующее в УФ-свете пятно. При опрыскивании 5% метанольным раствором NaOH окраска переходит в зеленую. |
| Сахара (дезоксисахара) | Нитропруссид натрия - периодат натрия | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) Смесь 1 объема насыщенного водного раствора перйодата натрия и 2 объемов воды. 2) Смесь 1 объем насыщенного водного раствора нитропрусида натрия, 3 объемов воды и 20 объемов насыщенного раствора пиперазина в 96% этаноле.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1, 10 мин сушат при комнатной температуре и затем опрыскивают раствором 2.Примечание: Максимальная голубая окраска дезоксисахаров наблюдается спустя 10 мин. Чувствительность обнаружения повышается при замене раствора для опрыскивания II смесью 4 объемов 1% раствора п-нитроанилина в этаноле и 1 объема 36% соляной кислоты (желтое флуоресцирующее пятно в монохроматическом УФ-свете). |
| Сахара, стероиды, терпены | Анисовый альдегид - серная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: свежеприготовленный раствор 0,5 мл анисового альдегида в 50 мл ледяной уксусной кислоты с добавкой 1 мл серной кислоты (1,84). Последующая обработка: 5-10 мин нагревают при 100-110 °С. Розовый фон можно осветлить действием водяных паров (водяная баня). (Вещества, содержащиеся в лишайниках, фенолы, терпены, сахара и стероиды окрашиваются, в зависимости от соединения, в фиолетовый, синий, красный, серый или зеленый цвет). В а р н а н т ы : а) Раствор для опрыскивания: 1 мл анисового альдегида вносят в 97 мл ледяной уксусной кислоты н к смеси добавляют 2 мл концентрированной серной кислоты.Последующая обработка: нагревают 6 мин при 120 °C. б) 0,5 мл анисового альдегида растворяют в смеси 10 мл ледяной уксусной кислоты + 85 мл метанола и добавляют 5 мл концентрированной серной кислоты. Для обнаружения производных терпена и др. около 10 мл этой смеси распыляют на пластинке 20Х20 см и нагревают приблизительно 10 мин при 100 °C. в) Для обнаружения сахаров применяют свежеприготовленную смесь 0,5 мл анисового альдегида + 9 мл этанола (95%-ного) + 0,5 мл концентрированной серной кислоты + 0,1 мл ледяной уксусной кислоты. После опрыскивания пластинку нагревают 5-10 мин при 90-100 °C. |
| Сахара (кетозы) | Антроновый реактив | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,3 г антрона растворяют в 10 мл ледяной уксусной кислоты и в раствор добавляют 20 мл 96%-ного этанола, 3 мл фосфорной кислоты (1,7) и 1 мл воды. Этот раствор устойчив в холодильнике в течение нескольких недель.Проведение реакции: после опрыскивания хроматограмму 5-6 мин нагревают до температуры 110 °C. Кетозы и кетозы, содержащие олигосахарнды, появляются в виде желтых пятен. |
| Сахара (кетозы) | Мочевина - соляная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 5 г мочевины растворяют в 20 мл 2 ч. соляной кислоты. Раствор смешивают с 100 мл этанола. Кетозы и кетозы содержащие олигосахариды, приобретают синюю окраску. Непродолжительное нагревание способствует реакции. |
| Сахара и сахарные спирты | Нитрат серебра | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 мл насыщенного водного раствора нитрата серебра при помешивании добавляют к 20 мл ацетона, а затем медленно по каплям прибавляют воду до полного растворения выпавшего нитрата серебра.Последующая обработка: пластинку помещают приблизительно на 15 мин в камеру, насыщенную аммиаком (в темноте) и сразу после этого нагревают при 80° до появления отчетливых темных пятен. |
| Сахара, барбитуровые кислоты и т. д. | Дифениламин - 4-сульфоновокислый барий |
Посмотреть Раствор для опрыскивания: готовят насыщенный раствор (0,2%-ный дифениламиносульфоновокислого бария в метаноле.Последующая обработка: если после интенсивного опрыскивания пятно не флуоресцирует в УФ-свете (254 нм), то пластинку нагревают 5-10 мин при 110 0C. |
| Сахара восстановленные, стероиды, глюкозиды, тиокислоты. | 2,3,5-Трифенилтетразолийхлорид | Посмотреть Раствор для опрыскивания: перед употреблением 1 объем 4% раствора ТФТХ. в метаноле смешивают с 1 объемом 1н. раствора NaOH в метаноле.Последующая обработка: нагревают 5-10 мин при 110 0C. Каждый раз нагревают до появления отчетливых красных пятен, при этом фон остается практически бесцветным. |
| Восстановленные сахара | Анилин-фосфорная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 объем 2 н. раствора анилина в насыщенном водой бутаноле-1 смешивают с 2 объемами 2 н. раствора ортофосфорной кислоты в бутаноле-1.Последующая обработка: хроматограмму нагревают 10 мин при 105 °C. |
| Восстановленные сахара | Анилинфталат | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,93 г анилина и 1,66 г о-фталевой кислоты растворяют в 100 мл насыщенного водой бутанола-1.Последующая обработка: пропитанную хроматограмму нагревают 10 мин при 105 °C. |
| Кислоты, сахара и сахарные спирты | Бензидин - метапериодат натрия | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0,1%-ный раствор метапериодата натрия. 2) К раствору 2,8 г бензидина в 80 мл 96°/о этанола добавляют 70 мл воды, 30 мл ацетона и 1,5 мл 1 н. соляной кислоты.Проведение реакции: после опрыскивания раствором 1 влажную хроматограмму опрыскивают раствором 2. |
Серосодержащие соединения
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| SH-Соединения (цистеин), S-соединения (цистин), производные цианамида (аргинин). | Нитропруссид натрия | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1,5 г нитропруссида натрия (динатрий пентацианонитрозилферрат) растворяют в 5 мл 2 н. соляной кислоты. После добавления 95 мл метанола и 10 мл раствора аммиака фильтруют. 2) 2га цианида натрия растворяют в 5 мл воды. Этот раствор доводят метанолом до 100 мл в мерной колбе. Следует принять меры предосторожности при опрыскивании раствором цианида натрия.Проведение реакции: при опрыскивании раствором 1 SH - соединения появляются в виде красных пятен. Аргинин становится оранжевым, а позже серо-голубым. При опрыскивании раствором 2 появляются соединения с мостиками - S-S в виде красных пятен на желтом фоне. В а р и а н т для связи S-S: Растворы для опрыскивания: 1) 5 г цианида натрия и 5 г карбоната натрия растворяют в мерной колбе на 100 мл в 23%-ном этаноле. 2) 2 г нитропруссида натрия растворяют в 100 мл 75% этанола.Проведение реакции: при опрыскивании раствором 1 SH-соединения сушат на воздухе в течение короткого времени, а затем опрыскивают раствором 2. |
| Персульфаты | Бензидин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 50 мг бензидина растворяют в 100 мл 1 н. уксусной кислоты. После опрыскивания персульфаты окрашиваются в синий цвет. |
| Сульфонамиды | Диазотирование и сочетание с 2-нафтолом |
Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1 г нитрита натрия в 100 мл 1 н. соляной кислоты. 2) 0,2%-ный раствор 2-нафтола в 1 н. КОН. Проведение реакции: опрыскивают свежеприготовленным раствором 1, спустя 1 мин опрыскивают раствором 2 и высушивают хроматограмму при 60 0C. |
| Тиомочевины | Нитропруссид натрия - гидроксиламин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5 г нитропруссида натрия растворяют в 10 мл воды. К раствору добавляют 0,5 г хлорида гидроксиламмония и 1г бикарбоната натрия. После прекращения выделения газа добавляют 2 капли брома и водой доводят до 25 мл. Реактив сохраняется около двух недель. |
| Тиосульфаты | Гексацианоферрат (III) калия - хлорид железа (III) | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1% водный раствор гексацианоферрата (III) калия. 2) 1% водный раствор хлорида железа (III).Проведение реакции: опрыскивают сначала раствором 1, затем раствором 2 и рассматривают хроматограмму под аналитической кварцевой лампой. |
Спирты, Альдегиды и Кетоны
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| а-Кетокислоты | о-Фенилендиамин-трихлоруксусная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 50 мг о-фенилендиамина растворяют в 100 мл 10% водном растворе трихлоруксусной кислоты.Проведение реакции: после опрыскивания хроматограмму нагревают не более 2 мин в сушильном шкафу при 100 0C, после чего флуоркцирующие пятна рассматривают под аналитической кварцевой лампой. |
| Альдегидные и кетонные группы, а также кетозы | 2,4-Динитрофенилгидразин | Посмотреть Растворы для опрыскивания: ,1) 0,4%-ный раствор 2,4-Динитрофенилгидразина в 2 н. соляной кислоте. 2) 1 г 2,4-динитрофенилгидразина в 1000 мл этанола смешивают с 10 мл соляной кислоты (1,19) (желтое пятно). П р и м е ч а н н е. Можно применять раствор 1 или 2. |
| Восстановленные вещества |
Нитрат серебра - аммиак |
Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 объем 0,1 н. раствора нитрата серебра смешивают по мере необходимости с 1 объемом 5 н. раствора аммиака. Обращаться осторожно! При длительном стоянии образуется взрывчатый азид серебра.Последующая обработка: 5-10 мин нагревают при 105 0 C до появления отчетливых темных пятен. |
| Восстановители | Фосфорномолибденовая кислота | Посмотреть Растворы для опрыскивания: а) свежеприготовленный раствор 5 г фосфорномолибденовой кислоты в 100 мл этанола.Последующая обработка: 5 мин нагревают при 80-90 0C, б) свежеприготовленный раствор 10 г фосфорномолибденовой кислоты в 100 мл этапола.Последующая обработка: 5 мин нагревают при 80-90 0C в) Раствор для опрыскивания: свежеприготовленный раствор 10 г фосфорномолибденовой кислоты в 100 мл этанола. Последующая обработка: нагревают 5 мин при 120 0C.Примечание. Обработка парами аммиака обесцвечивает фон. |
| Высшие спирты и кетоны | Ванилин - серная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 3 г ванилина растворяют в 100 мл абсолютного спирта и в раствор добавляют 0,5 мл серной кислоты (1,84). Последующая обработка: хроматограмму нагревают при 120° до появления зелено-голубых пятен. П р и м е ч а н и е. Вместо серной кислоты можно применять 1,5 г п-толуолсульфокислоты. |
Стероиды, терпены и т.п.
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| D4-3-Кетостероиды | Гидроокись натрия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 10%-ный водный раствор NaOH. Проведение реакции: после опрыскивания хроматограмму высушивают в течение 10 мин при 80 0С. D4-3-кетостероиды дают желтую флуоресценцию в монохроматическом ультрафиолете. |
| Стероиды | Бензоилхлорид - хлорид цинка | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) Раствор 20 г хлорида цинка в 30 мл ледяной уксусной кислоты. 2) 50 г бензоилхлорида растворяют в хлороформе. Раствор доводят до 100 мл хлороформом.Проведение реакции: пластинки опрыскивают раствором 1, нагревают 5 мин при 90°, сухую хроматограмму опрыскивают раствором 2 и нагревают 2-3 мин при 90° (пятна рассматривают в видимом и ультрафиолетовом свете). |
| Стероиды | Ванилин - фосфорная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 г ванилина растворяют в 100 мл 50%-ной о-фосфорной кислоты. Последующая обработка: 10-20 мин нагревают при 1200C. |
| Стероиды (стероидные глюкозиды) | Хлорид сурьмы (III) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 25 г хлорида сурьмы (III) растворяют в 75 г хлороформа, очищенного от этанола. Для очистки от этанола хлороформ пропускают через колонку с активной окисью алюминия. Как правило, применяют насыщенный раствор хлорида сурьмы (III) в хлороформе или в четыреххлористом углеродe.Последующая обработка: после опрыскивания хроматограмму нагревают 10 мин при 100 0C (рассматривают хроматограмму в монохроматическом ультрафиолетовом свете). |
| Стероиды | Хлорид сурьмы (III) - ледяная уксусная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 вес. ч. хлорида сурьмы (III) растворяют в 1 вес. ч. ледяной уксусной кислоты.Последующая обработка: пластинки нагревают 5 мин при 95 0C. |
| Терпены, масла и смолы | Хлорид сурьмы (V) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 2 объема хлорида сурьмы (V) смешивают с. 8 объемами четыреххлористого углерода.Проведение реакции: после опрыскивания пластинки нагревают при 120 0C до появления пятен. |
| Стероиды и флавоноиды | п-Толуолсульфокислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 20 г толуолсульфокислоты растворяют в 100 мл абсолютного этанола.Проведение реакции: после опрыскивания несколько минут нагревают при 100 0C, хроматограмму рассматривают в монохроматическом УФ-свете. |
| Стероиды и их глюкозиды | Трихлоруксусная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в 100 мл хлороформа.Проведение реакции: после опрыскивания хроматограмму сушат в сушильном шкафу при 100 0C и рассматривают под кварцевой лампой. |
| Стероиды и их глюкозиды | Трифторуксусная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1% раствор трифторуксусной кислоты в хлороформе. Последующая обработка: 5 мин нагревают при 130 0C. |
| Стероиды | Фосфорная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 объем о-фосфорной кислоты (1,7) разбавляют 1 объемом воды.Проведение реакции: опрыскивают пластинку, пока она во влажном состоянии не станет прозрачной, затем нагревают 10-20 мин при 120° и флуоресцирующие пятна рассматривают под кварцевой лампой. |
| Стероиды | Хлорная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 2% водный раствор хлорной кислоты.Последующая обработка: нагревают 10 мин при 150 0C.Примечание. Получают однородное коричневое пятно, годное для количественного определения. |
| Стероиды (тритерпены, стерины и стероиды) | Хлорид олова (IV) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: к 160 мл смеси равных объемов хлороформа и ледяной уксусной кислоты добавляют 100 мл хлорида олова (IV). Последующая обработка: нагревают 5-18 мин при 100° и рассматривают хроматограмму в фильтрованном УФ-свете (365 нм).Последующая обработка: нагревают 5 -18 мин при 100 0С и рассматривают хроматограмму в фильтрованном УФ-свете (265 нм). |
| Тритерпены, стерины и стероиды | Хлорсульфоновая кислота - ледяная уксусная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 5 мл хлорсульфоновой кислоты при осторожном охлаждении растворяют в 10 мл ледяной уксусной кислоты.Последующая обработка: 5 мин нагревают при 130 0. Пластинку рассматривают в ультрафиолетовых лучах (365 нм). |
| Терпенальдегиды, флавоноиды, углеводы | Бензидин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5 г бензидина растворяют в 20 мл ледяной уксусной кислоты и 80 мл этанола. Последующая обработка: нагревают 15 мин при 100° (ванилин приобретает окраску от желтой до оранжевой). Пятна некоторых веществ окрашиваются еще сильнее, если после нагревания провести опрыскива-ние разбавленной соляной кислотой. |
Фенолы
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Фенолы и амины, применяемые для реакции сочетания | Прочная голубая соль В (диазореактив) |
Посмотреть Раствор, для опрыскивания: свежеприготовленный 0,5%-ный водный раствор прочной голубой соли В.Последующая обработка: опрыскивают 0,1 н. NaOH. |
| Фенолы и амины, применяемые для реакции сочетания |
Диазотированная сульфаниловая кислота |
Посмотреть Приготовление соли диазония: 25 г сульфаниловой кислоты растворяют в 125 мл 10%-наго раствора КОН. (.охлажденный раствор смешивают с 100 мл 10% раствора нитрита натрия. Этот раствор постепенно, по каплям при помешивании прибавляют к охлажденной соляной кислоте (40 мл НС1 (d=1,19) в 20 мл воды). Температура реакционной смеси не должна быть выше 8 0C. Образовавшуюся диазониевую соль отсасывают на пористом фильтре, промывают последовательно ледяной водой, этанолом, эфиром и высушивают. Полученная таким образом соль, сохраняемая в холодильнике в банках из темного стекла, устойчива несколько месяцев. Вследствие ограниченной устойчивости во многих случаях предпочитают прочную голубую соль В (реактив N 28).Раствор для опрыскивания: 0,1 г диазониевой соли перед употреблением растворяют в 20 мл 10% водного раствора соды. Примечание. При приготовлении реактива должны быть учтены правила техники безопасности, соблюдаемые при получении и хранении взрывоопасных диазониевых солей. |
| Фенолы | Диазотированный п-нитроанилин |
Посмотреть Исходный раствор: 0,7 г п-нитроанилина растворяют в 9 мл концентрированной соляной кислоты (1,19) и разбавляют до 100 мл водой.Раствор для опрыскивания: 4 мл исходного раствора по каплям при охлаждении льдом смешивают с 5 мл 1% водного раствора нитрита натрия, а затем доводят до 100 мл водой, охлажденной льдом. Примечание. Каждый раз перед употреблением готовят свежий раствор. |
| Фенолы | Фосфорномолибденовая кислота | Посмотреть 10 г вольфрамата натрия и 2,5 г молибдата натрия растворяют в 70 мл воды и добавляют последовательно 5 мл 85% фосфорной кислоты и 10 мл концентрированной соляном кислоты (1,19). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 10 часов. Затем добавляют 15 г сульфата лития 5 мл воды и 1 каплю брома и еще раз кипятят 15 мин, после охлаждения доводят до 100 мл в мерной колбе (исходный раствор). Раствор не должен иметь зеленой окраски.Реактивы для опрыскивания: 1) 20% водный раствор карбоната натрия. 2) Перед употреблением смешивают 1 часть исходного раствора с 3 объемами воды.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1, немного сушат и опрыскивают раствором 2. |
Прочие
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Антиокислители, цианамид и его производные | 2,6-Дихлорхинонхлоримид | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 г 2,6-дихлорхинонхлоринида растворяют в 100 мл абсолютного этанола. Раствор в холодильнике устойчив в течение трех недель. Для мочевины не применим. |
| Ацетилхолииа и его эфиры | Гидроксамовая кислота - хлорид железа | Посмотреть Исходные растворы: а) 20 г хлорида гидроксиламмония растворяют в 50 мл воды. Раствор доводят дв 200 мл этанолом и хранят в холодиль-нике, б) 50 г гидроокиси калия растворяют в возможно меньшем количестве воды, затем этанолом доводят до 500 мл. Растворы для опрыскивания: 1) 1 объем раствора "а" смешивают с 2 объемами раствора "б". Выпавший хлорид калия отфильтровывают. Приготовленный таким образом раствор хранят в холодильнике (устойчив около 2 недель). 2) .16 г тонкоизмельченного порошка хлорида железа (FeCl3*6H2O) растворяют в 20 мл 10 н. соляной кислоты. Раствор встряхивают с 200 мл диэтилового эфира до образования однородного раствора. Хорошо закрытый раствор для опрыскивания 2 устойчив в течение длительного времени. Проведение реакции: хроматограмму опрыскивают раствором 1, высушивают непродолжительное время при комнатной температуре, а затем опрыскивают раствором 2. |
| Катехины | Ванилин - соляная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5 г ванилина растворяют в 50 мл соляной кислоты (1,18). На высушенной при комнатной температуре хроматограмме катехин окрашен в красный цвет. |
| Креатинин, гликоциамидин и лактамов а-гуанидиновых кислот | Пикриновая кислота - щелочь | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1% раствор пикриновой кислоты в этаноле. 2) 5% спиртовой раствор КОН.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1 и после высушивания - раствором 2 (окрашивание в оранжевый цвет). |
| Кумарины | Гидроокись калия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1%-ный раствор КОН в этаноле. Проведение реакции: высушенную после опрыскивания хроматограмму рассматривают под аналитической кварцевой лампой. |
| Лактоны (NIP-ненасыщенные) | Нитропруссид натрия - NaOH | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 % раствор нитропруссида натрия в 1 н. растворе NaOH, который готовят с 50%-ным этанолом (пятна от красных до красно-фиолетовых). |
| Лактоны (дигиталоидные пятичленные) | 3,5-Динитробензойная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1 г 3,5-динитробензонной кислоты растворяют в смеси 50 мл метанола н 50 мл водного 2 н. раствора КОН. |
| Оксиантрахиноны | Ацетат магния | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5%-ный раствор ацетата магния в метаноле. Проведение реакции: после опрыскивания нагревают в течение 5 мин до 90 0C. Окрашивание от оранжевого до фиолетового. |
| Пиперонал и ванилин | Гидразин-сульфат | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 90 мл насыщенного водного раствора гидразин-сульфата смешивают с 10 мл 4 н, соляной кислоты. Влажную хроматограмму рассматривают под кварцевой лампой до и после действия паров аммиака. |
| Хлорированные углеводороды, камфары, гетероциклические соединения и т. д. | Флуоресцеин натрия - родамин В - карбонат натрия | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0,5% раствор родамина В в этаноле. 2) 10% водный раствор карбоната натрия.Проведение реакции: пластинки с флуоресцеином натрия (см. реактив 140) опрыскивают после разделения реактивом 1, сушат и интенсивно опрыскивают реактивом 2. Некоторые пятна лучше обнаруживаются в виде флуоресцирующих пятен в свете аналитической кварцевой лампы. |
| Холим | Дипикриламин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,2 .г дипикриламина растворяют в смеси 50 мл ацетона и 50 мл бидистиллята (холим и производные появляются в виде красных пятен на желтом фоне). |
| Холим | Фосфорномолибденовая кислота - хлорид олова (II) | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1 г фосфорномолибденовой кислоты растворяют в 100 мл смеси равных объемов этанола и хлороформа. 2) 1 а хлорида цинка (II) растворяют в 100 мл 3 ч. соляной кислоты. Каждый раз приготовляют свежий реактив. Проведение реакции: пластинки опрыскивают раствором 1, сушат 3 мин, опрыскивают раствором 2 и вновь сушат 10 мин. |
| Холин | Гексацианоферрат (II) калия - хлорид кобальта (II) | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) Свежеприготовленный 1% водный раствор гексанцианоферрата (II) калия. 2) 0,5'%)-ный водный раствор хлорида кобальта (II).Проведение реакции: опрыскивают раствором 1, непродолжительное время сушат и опрыскивают раствором 2. Холин становится зеленым. |
| Цианамид и его производные | Нитропруссид натрия - гемсанцианоферрат (III) калия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: по 1 объему 10% раствора NaOH, 10% раствора нитропруссида натрия и 10% раствора гексанцианоферрата (III) калия смешивают с 3 объемами воды. Раствор оставляют стоять при комнатной температуре самое малое на 20 мин. В холодильнике этот раствор сохраняется в течение нескольких недель.В а р и а н т:Раствор для опрыскивания: 2 мл 5% водного раствора нитропруссида натрия смешивают с 1 мл 10% раствора NaOH и 5 мл 3% раствора пергидроля, затем эту смесь разбавляют. 15 мл воды. Каждый раз надо готовить свежий реактив. Цианамид - фиолетовый, дицианамид - карминно-красный, гуанил-мочевина - желто-оранжевая, гуанидин - красно-оранжевый, аргинин-светло-красный, креатин - кармннно-красиый, креатин - желто-коричневый, агматин-розовый, гуанидин-уксусная кислота - карминно-красная, тиомочевина - фиолетовая, мочевина - светло-розовая. |
| Эфиры 3,5-динитробензойной кислоты | 1-Нафтиламин | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1%-ный раствор 1-нафтиламнна в этаноле. 2) 10% раствор едкого кали в метаноле. Красно-коричневое окрашивание. |
- Подробности
- Опубликовано 14 Сентябрь 2013
- Автор: Administrator
Реактивы для обнаружения веществ на ТСХ.
Неорганические катионы и анионы.
Источник: Э. Шталь "Хроматография в тонких слоях". М., 1965
Катионы
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Катионы | Родамин (диметиламино-бензилиденроданин) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1-5% раствор родамина в этаноле.Последующая обработка: опрыскивают 25% раствором аммиака или помещают во влажную камеру, насыщенную парами аммиака (наблюдение в монохроматическом УФ-свете). |
| Ионы алюминия | Морин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1%-ный раствор морина в ледяной уксусной кислоте (яркая светло-зеленая флуоресценция под аналитической кварцевой лампой). |
| Ионы алюминия, хрома и лития | Ауринтрикарбоновая кислота (аммонийная соль) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,1%-ный раствор аммонийной соли ауринтрикарбоновой кислоты в 1%-ном водном растворе ацетата аммония.Последующая обработка: хроматограмму помещают в камеру, насыщенную парами аммиака. |
| Ионы бария и стронция | Родизонат натрия | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1%-ный водный раствор радизоната натрия. 2) 20%-ный раствор аммиака. |
| Ионы бария, стронция и кальция | 8-Оксихинолин (оксин) | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5 г 8-оксихинолина растворяют в смеси 60 мл этанола и 40 мл воды.Последующая обработка: опрыскивают 25% раствором аммиака или помещают хроматограмму в насыщенную аммиаком влажную камеру (наблюдение в монохроматическом УФ-светe). |
| Ионы железа (III) | Гексацианоферрат (II) калия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: свежеприготовленный 2%-ный водный раствор гексанцианоферрата (II) калия. |
| Ионы золота | Хлорид олова - иодид калия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 5,6 хлорида олова (II) растворяют в 10 мл соляной кислоты (1,19), разбавляют водой до 100 мл и добавляют 0,2 г иодида калия. При опрыскивании пластинки проявляются черные пятна. |
| Ионы калия | Родамин В | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0,1 н. NaOH. 2) 1% спиртовый раствор реактива на калий. 3)0,5% спиртовой раствор родамина В.Проведение реакции: опрыскивают реактивом 1, сушат, опрыскивают реактивом 2 и в заключение опрыскивают реактивом 3. (Интенсивная темно-синяя флуоресценция в монохроматическом УФ-свете. Большое количество калия обнаруживается уже в видимом свете светло-красным пятном на темно-красном фоне). |
| Ионы лития, кальция, магния, алюминия, тория, циркония, аммония и селена |
Ализарин | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) насыщенный спиртовой раствор ализарина. 2) 1 н. раствор NaOH.Проведение реакции: хроматограмму опрыскивают раствором 1, непродолжительное время сушат и опрыскивают раствором 2. Последующая обработка: хроматограмму помещают а камеру, насыщенную парами аммиака. |
| Ионы магния и алюминия | 8-Оксихинолин - койевая кислота | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) Раствор 2,5 а 8-оксихинолина и 0,5 г койевой кислоты в 500 мл 90% этанола. 2) 25% раствор аммиака (наблюдение в монохроматическом ультрафиолете). |
| Ионы меди, кобальта, никеля и марганца | Рубеановый водород | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 0,5% раствор рубеанового водорода в 96% этаноле. 2) 25% раствор аммиака.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1, сушат, опрыскивают раствором 2 или помещают хроматограмму во влажную камеру, насыщенную аммиаком. |
| Ионы металлов | Койевая кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,1 г койевой кислоты растворяют в 100 мл 60% этанола.Проведение реакции: после опрыскивания наблюдают флуоресценцию в УФ-свете. |
| Ионы серебра, свинца, меди, олова, марганца, цинка и кальция | Дифенилкарбазид | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) 1%-ный раствор дифенилкарбазида в 96%-ном этаноле. .2) 25%ный раствор аммиака. |
| Ионы серебра, цинка, кадмия и продукты присоединения ртути к ненасыщенным липидам | Дифенилкарбазон | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) насыщенный раствор дифенилкарбазона в 96% этаноле. 2) 25%-ный раствор аммиака или 1 н. NaOH.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1, а затем растворам 2. Примечание. Для продуктов присоединения ртути достаточно опрыскивать 0,1%-ным этанольным раствором дифенилкарбазона. |
| Ионы сурьмы | Тиосульфат натрия - ацетат меди | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1) Насыщенный водный раствор тиосульфата натрия. 2) 0,4 г ацетата меди растворяют в смеси 2 мл ледяной уксусной кислоты и 48 мл воды.Проведение реакции: опрыскивают раствором 1, слегка нагревают, избыточный тиосульфат натрия смывают водой, опрыскивают раствором 2. |
| Ионы сурьмы, меди, никеля, железа, хрома, марганца, калия, лития, бериллия | Кверцетин | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,2%-ный раствор кверцетина в 96% этаноле.Последующая обработка: опрыскивают 20%-ным раствором аммиака или помещают в камеру, насыщенную парами аммиака (наблюдение в монохроматическом УФ-свете). |
| Ионы тяжелых металлов | Йодистый калий-сероводород | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 2%-ный водный раствор йодистого калия. Проведение реакции: после опрыскивания пластинку сушат и помещают в сосуд с парами аммиака. Через несколько минут пластинку переносят в другой сосуд, заполненный сероводородом. (Осторожно! Сероводород ядовит и взрывается. Лучше всего заполнять сосуд газом из аппарата Киппа в тяге). |
| Ионы щелочных и щелочно-земельных металлов | Виолуровая кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 1,5%-ный водный раствор виолуровой кислоты. При растворении виолуровую кислоту нельзя нагревать свыше 60°! Проведение реакции: после опрыскивания хроматограмму нагревают 20 мин при 100 0C. |
Анионы
Обнаруживаемая группа |
Реактив |
Состав реактива и проведение обработки |
| Ионы галогенов | Бромкрезоловый пурпуровый | Посмотреть Раствор для опрыскивания: к 0,1%-ному раствору бромкрезолового пурпурового в этаноле добавляют несколько капель разбавленного раствора аммиака до ясно выраженного изменения окраски. |
| Ионы галогенов | Нитрат серебра - аммиак-флуоресцеин | Посмотреть Растворы для опрыскивания: 1.) 1 г нитрата серебра растворяют в 100 мл 0,5 н. раствора аммиака. 2) 0,1 г флуоресцеина растворяют в 100 мл этанола.Проведение реакции: сначала опрыскивают раствором 1 и после непродолжительного подсушивания - раствором 2. |
| Ионы сероводородной группы | Сульфид натрия | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0,5%-ный раствор сульфида натрия, свежеприготовленный. |
| Ионы фтора | Цирконализариновый лак - соляная кислота | Посмотреть Раствор для опрыскивания: 0.05 г цирконилхлорида (ZrOCl*8H20) и 0,05 г ализаринсульфоната натрия растворяют в 100 мл 2 н. соляной кислоты. |
| Неорганические анионы | 2,6-Дихлорфенол-индофенол-нитрат серебра | Посмотреть Раствор для опрыскивания (перед употреблением готовят свежий раствор): 0,2 г 2.6-дихлорфенолиндофенолнатрия растворяют в 100 мл 96%-ного спирта, добавляют 3 г нитрата серебра, хорошо встряхивают и фильтруют. |
- Подробности
- Опубликовано 14 Сентябрь 2013
- Автор: Administrator
Обнаружение веществ при тонкослойной (ТСХ) и колоночной (КХ) хроматографии.
Детекторы
1. Специфические свойства сорбента.
Для обнаружения веществ при проведении тонкослойной или колоночной хроматографии могут быть использованы специально подготовленные сорбенты:
-
Сорбент + флуоресцирующее вещество (Например, Merk).
Такая система позволяет обнаружить пятна веществ при облучении ТСХ пластины УФ светом (наиболее часто 254 нм). При этом флуоресцирующее вещество окрашивает пластину в зеленый цвет, а пятна продукта остаются темными. -
Сорбент + крахмал (Например, Silufol).
Пластины после элюирования выдерживают в йодной камере 1-2 минуты. После этого если на пластину подышать (или смочить) вся пластина окрашивается в синий цвет, при этом пятна веществ отличаются по цвету от самой пластины.
2. Прожигание пластины
Органические вещества как правило обугливаются при прокаливании пластины ТСХ при 300-400 °С. При этом важно следить (регулировка температуры), чтобы не происходило обугливание самой пластины. Вещества проявляются в виде черных пятен. Метод не подходит для летучих веществ.
3. Использование специальных реактивов.
Метод основан на качественных (цветных реакциях) компонентов разделяемой смеси. Сами реагенты и методы работы с ними можно найти здесь (органические вещества) или здесь (неорганические ионы).
4. Использование детекторов.
Детекторы - устройства для количественного или качественного определения веществ разделяемой смеси. Все детекторы характеризуются высокой точностью и высоким пределом обнаружения (до 10-12 моль).
Рассмотрим наиболее часто использующиеся детекторы.
-
Пламенно-ионизационный детектор. Используется в газовой хроматографии. Поступающие вещества из колонки сжигаются в водородном пламени. Между электродами (один - на горелке, другой над пламенем) возрастает электрический ток, сила которого пропорциональная массе вещества.
-
Фотоионизационный детектор. Используется в газовой хроматографии. Поступающие вещества из колонки ионизируется (образуя ион и электрон) под действием УФ света. Определяют по изменению проводимости газовой среды.
-
Электронозахватный детектор. Используется в газовой хроматографии. Поступающие вещества из колонки обрабатываются пучком электронов (b-излучение 63Ni или a-излучение 239Pu). Определяют по изменению ионного тока.
-
Катарометрический детектор. Используется в газовой хроматографии. Поступающие вещества из колонки изменяют электрическое сопротивление нагретой металлической нити в потоке газа из колонки. Используют "камеру сравнения", через которую пропускают чистый газ носитель.
-
Масс-спектрометр.Используется в газовой хроматографии и жидкостной хроматографии. Поступающие вещества из колонки направляются в масс-спектрометр, регистрирующий образующиеся молекулярные ионы компонентов смеси.
-
УФ-фотометрический детектор. Используется в жидкостной хроматографии. Поступающие вещества из колонки определяются путем измерения количества излучения, адсорбируемого веществом при прохождении света через ячейку детектора в диапазоне 180-400 нм длин волн. Важно! Этот метод можно применять и для веществ не поглощающих УФ излучение. В этом случае в элюент добавляют в небольшой концентрации вещество, поглощающее УФ излучение, тогда анализируемое вещество дает отрицательный пик.
-
Рефрактометрический детектор. Используется в жидкостной хроматографии. Поступающие вещества из колонки сравнивается с чистой смесью по показателю преломления.
-
Кондуктометрический детектор. Используется в жидкостной хроматографии. Измерение электропроводности элюента.
-
Испарительный детектор светорассеяния. Используется в жидкостной хроматографии. Измерение светорассеяния испаренной смеси элюента и вещества.